动物组织总rna提取的原理与步骤

  RNA是细胞中的关键分子，参与多种生物学过程，包括编码、解码、调控和表达基因。为了研究这些过程，我们需要利用核酸提取试剂从动物组织中提取RNA。本文慧庆小编将详细介绍动物组织总RNA提取的原理和步骤。
  

  一、动物组织总RNA提取的原理

  
  1.分子结构与特性：RNA由核糖、磷酸和四种碱基组成：腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶和胞嘧啶。其稳定性相对低，容易受到核酸酶的降解。因此，在RNA提取过程中，防止RNA的降解是很重要的。
  
  2.细胞破裂：为了从组织中释放RNA，先需要破裂细胞。这通常通过物理和化学方法结合进行，如机械破碎和使用高浓度盐溶液。
  
  3.RNA的提取与纯化：RNA的提取基于其与其他细胞成分的不同亲和性。在高浓度盐的存在下，RNA在有机溶剂如酚中是可溶的，而DNA和蛋白质则是不溶的。此外，利用酒精沉淀法可以进一步纯化RNA。
  
  4.RNA的稳定性：提取出的RNA需要在低温和避光的条件下保存，并添加抑制核酸酶活性的试剂，以确保其稳定性。

  二、动物组织总RNA提取的步骤

  

  1.样本的准备与处理

  
  选择健康、无污染的组织样本，避免外部污染因素影响RNA质量。组织样本需在尽快时间内进行处理或存储以减少RNA的降解。一般使用液氮立即冷冻组织，然后在-80°C的条件下长期保存。在实际操作中，还需要避免多次冻融，因为这可能会导致RNA的降解。
  

  2.细胞破裂

  
  为了从组织中释放RNA，细胞膜和细胞核膜需要被破碎。组织样本放入均质器中，并添加适量的核酸提取缓冲液。该缓冲液通常含有某些高浓度的盐，可以帮助稳定细胞中的蛋白质，防止它们对RNA的降解。通过机械破碎的方法，如研磨或超声，确保细胞均匀破裂，释放内含的RNA。
  

  3.RNA的提取

  
  RNA的提取是基于其与其他细胞成分的相对亲和性。先将均质液转移到离心管中，加入等体积的酚-氯仿。酚有助于蛋白质的沉淀，而RNA则保持在水相中。充分混匀后，离心分离两个相。水相（上层）含有RNA，而有机相（下层）和界面含有蛋白质和DNA。为了确保RNA的纯度，需要重复此步骤至少一次。
  

  4.RNA的纯化

  
  RNA的纯化步骤旨在进一步除去可能的污染物。将上述提取步骤中得到的水相转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇或冷冻乙醇，使RNA沉淀。充分混匀后，置于低温冷冻（例如，-20°C或-80°C）一段时间，通常为1小时或过夜。随后，进行离心以收集RNA沉淀。沉淀物需要用75%的乙醇洗涤1-2次以除去残余的盐和其他杂质。完成洗涤后，乙醇需完成挥发，然后使用无酶抑制剂的DEPC水或RNase-free的缓冲液重悬RNA。
  
  动物组织总rna提取完成后，需要将提取后的RNA进行定量和质控：紫外光谱光度计是常用的定量工具，其中260nm和280nm的吸收比值可以反映RNA的纯度；对于质控，常用1%琼脂糖凝胶电泳进行，通过电泳带的形态可以判断RNA的完整性。此外，还可以使用专业的生物分析仪器进行更为准确的质量评估。