核酸是生命的基本物质之一,根据化学组成不同,可以将核酸分为DNA和RNA。核酸是分子生物学研究的基础,而提取到的核酸质量的高低也直接影响到了下游实验的成败。核酸提取纯化的方法有很多,接下来慧庆小编就为大家分享常见的核酸提取纯化方法有哪些。
常见的核酸提取纯化方法
1、煮沸裂解法
此方法是手动提取核酸,采用煮沸裂解法提取核酸,提取到的核酸的量相对较少且杂质多,提取到的核酸可能会出现断裂,这种方法主要适用于一些粗略的实验。
2、酚氯仿抽法
此方法属于传统的核酸提取方法,利用两种不同的有机溶剂交替抽提,将蛋白去除,获得纯化后的核酸。酚氯仿抽提的优势是成本比较低,对实验条件要求较低,提取到的DNA保持天然状态。获得的DNA纯度高、片段大、效果良好,缺点是操作较为繁琐,且酚和氯仿都对人体有一定的危害。
3、阴离子去污剂法
阴离子去污剂法是利用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,然后就可以直接从生物材料中提取DNA。由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,同时阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA此方法操作简单,也能够提取到较高分子量DNA,但所得产物含糖类杂质较多,因此并未得到广泛使用。
4、离心柱法
离心柱法是利用核酸表面覆盖的由水分子构成的薄膜,在高盐环境下,亲水膜会遭到破坏,而核酸则被吸附在离心柱上,其他的杂质经过离心沉淀后与核酸分离,得到纯化后的核酸。此方法的缺点是核酸流失多,以及无法大量提取核酸。
5、磁珠法
磁珠法是广泛应用的核酸提取纯化方法,目前多用于诊断行业,它能够实现高通量、自动化操作,因此很受欢迎。此方法是利用磁珠的超顺磁性,吸附核酸,核酸与磁珠结合后,经过数次洗涤与磁场捕获,洗脱下来的核酸即可通过PCR或其它特定方法来检测特定的DNA或RNA。主要用于从人血清或血浆样品中提取DNA和RNA。
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