磁珠法核酸提取常见的问题及解决办法

  磁珠法核酸提取是现在常用的DNA提取手段，它有着检测灵敏度高、可自动化操作、安全且快速等特点，在生物检测中得到了广泛应用。但是在核酸提取过程中，经常也会有这种问题出现，今天慧庆小编就为大家介绍磁珠法核酸提取常见的问题及解决办法。

  磁珠法核酸提取常见的问题及解决办法

  1、裂解效果不好

  出现这种情况，多数属由于裂解液出现问题导致的。有人会想要用增加裂解液使用量的方式来解决，但是在磁珠法核酸提取过程中，随着裂解液体积的增大，磁珠与核酸碰撞几率降低，磁珠吸附核酸效率降低，可能导致核酸提取量降低、核酸提取纯度降低等问题。增加裂解液使用量带来的负面影响往往大于正面。

  如果裂解效果不好，可以调整裂解液的配方、裂解方式、裂解时间或是减少样品量等来进行解决。

  2、核酸降解

  出现这种情况多数原因是由于样品的反复冻融，其次也可能是由于在提取过程中剪切力、磁珠表面不均匀、洗脱温度过高和提取流程时间过长导致的。解决办法就是避免样品反复冻融，以及操作过程中出现的问题。

  3、核酸纯度不高

  核酸提取纯度不高，主要污染原因为蛋白及（或）盐类残留。可在提取过程中加入蛋白酶K降解样品中的蛋白，减少蛋白残留污染，同时用高浓度有机溶剂对核酸进行清洗，减少盐残留对酶活的抑制。

  4、提取的核酸得率低

  将样品量与试剂配比控制在合理的范围内，避免超过裂解能力。其次在洗脱的步骤，使用足量的洗脱液洗脱并充分混匀，避免有团块残存；实验耗材要匹配，如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同，也会影响核酸的得率。

  5、磁珠结团

  磁珠结团是核酸提取过程中经常遇到的现象，尤其手工操作时，这是由磁珠本身特性和磁珠所处试剂环境两方面造成的，有些磁珠不仅在全血DNA提取过程中会结团，其他的样本也同样会结团，其实结团现象可以用来提前预判实验结果，结团往往是吸附了大量核酸，如果哪次实验没有结团，本次的实验结果或许会不太好，不过也不能一概而论，杂质太多也是引起磁珠结团的原因。通过修改试剂配方，优化试剂用量，可以改善磁珠的结团现象，这就需要对各种参数进行调整。

  关于磁珠法核酸提取常见的问题及解决办法，以上就是慧庆小编带来的相关介绍，希望能够对您有所帮助。洛阳慧庆生物科技有限公司研发生产有不同规格高品质的核酸提取试剂，如果您有相关需求，欢迎来电咨询或者在网站留言给我们。