如何更好的获得细菌基因组DNA/RNA？慧庆实验成果分析

  核酸是重要的生物信息分子，是分子生物学的主要研究对象之一。利用核酸提取试剂提取细菌基因组DNA/RNA可用于PCR扩增、分子杂交、核酸检测分析、基因突变检测和测序等，而核酸提取的质量对实验结果的准确性影响很大。那么如何更好的获得细菌基因组DNA/RNA？慧庆生物结合具体的实验成果为大家分析一下。
  

  实验论证：如何更好的获得细菌基因组DNA/RNA

  
  1.实验目的
  
  用自动核酸提取纯化仪能够成功提取细菌基因组DNA，并获得较好的电泳条带。
  
  2.实验仪器及试剂
  
  仪器：台式离心机（SIGMA）、超微量分光光度计（Q5000）、电泳仪（北京六一仪器厂，DYY-7C型）、自动核酸提取仪（LJbio32H）
  
  试剂：细菌基因组DNA提取试剂盒（磁珠法、预分装）
  
  3.实验方法
  
  （1）样本处理：取过夜培养的细菌100～1000 μL（细胞数为108-109）至1.5 mL 离心管中10000g离心2min，吸弃上清，再加入200 μL EB重悬菌体备用。
  
  （2）按照试剂盒说明书手工操作，提取细菌基因组DNA。
  
  （3）优化自动核酸提取纯化仪的上机参数（①65℃裂解，8min ②65℃裂解，10min ③室温裂解，10min）。
  
  （4）用超微量分光光度计测量提取的DNA，并进行电泳检测。
  
  4.实验结果
  
  （1）在超微量分光光度计上用EB润洗点点空白，取1-2 μl的洗脱产物检测，记录各个波长的吸光度，得到的数据如下：
  
  备注：加底纹的电泳
  
  （2）在1%的琼脂糖凝胶上加入6μL洗脱的基因组DNA/扩增产物/DNA Marker进行电泳，结果如下：
  M：DL2000Ladder
  
  1:65℃裂解，8min；2-3: 65℃裂解，10min；4-5: 常温10min
  
  5.分析与讨论
  
  （1）由浓度测量结果和产物电泳图可知，三种提取条件下纯度与纯度稍有差异，室温裂解条件下，电泳结果点样孔有滞留，裂解效果比其他两种稍差，但也有明显DNA带与两条RNA条带。
  
  （2）电泳图编号4 的DNA条带略暗，与测量结果也能对应起来，分析原因是提取所用耗材此孔位对应的磁棒套稍长一点，仪器提取过程中磁棒套搅拌过程中影响其裂解效果，导致此孔提取核酸测量值与电泳结果稍差。
  
  （3）对比三种程序提取效果，65℃裂解8min的测量值较均一，重复性较好，DNA条带最亮。
  
  如何更好的获得细菌基因组DNA/RNA？看了以上的实验过程以及结果分析，相信大家已经有了更深入的认识。洛阳慧庆生物生产的细菌基因组DNA提取试剂（磁珠法）核酸提取成功率更高、价格适中，受到高校及科研单位用户的好评。如您有相关疑问或者采购需求，请留言或者电话联系我们。