磁珠法核酸提取是现在常用的核酸提取方法,它有着灵敏、快速、简单、重复性好、提取率高的优点,被广泛应用于生物实验室以及各项医学检测上。虽然磁珠法核酸提取已经被广泛应用,但是在提取过程中也有一些误区,接下来慧庆小编就为大家介绍磁珠法核酸提取过程中的常见误区。
磁珠法核酸提取过程中的常见误区
1、磁珠越多,提取效果就越好
在出现核酸提取效果不佳的情况,很多人的想法就是增加生物磁珠的用量,觉得这样就能够吸附更多核酸,提取效果也就更好,这种方法是不可取的。生物磁珠与液体的比例都是有一定阈值的,超过这个比例,过多的生物磁珠在液体内无法均匀分散,影响到提取效果。小编建议,在提取效果不佳的时候,大家可以尝试减少生物磁珠的使用量,这样反而能够达到提升提取率的效果。
提醒大家,通常磁珠法试剂盒给出的磁珠参考用量都是略微过量的,因此需要增加生物磁珠的用量来改善提取效果的情况并不多。如果已经确定是由于生物磁珠用量不足而导致的核酸提取效果不好,那么是可以通过增加生物磁珠的用量来改善核酸提取效果的。
2、试剂使用的越多,提取效果越好
细胞裂解效果不好?多加点裂解液。洗涤效果不好?多加点洗涤液。这应该是很多使用者在使用磁珠法核酸提取试剂盒中的惯性思维,但是对于磁珠法而言,每增加一部分的液体体积,就减少了生物磁珠碰撞的几率。而降低生物磁珠碰撞的几率,也会导致吸附率大大降低。
磁珠法核酸提取的核心就是生物磁珠吸附核酸的效率,如果无法保证生物磁珠的碰撞效率,那么核酸提取效率也无法得到保证,所以采用增加试剂使用量的方法来改善核酸提取效果并不一定有效。
3、洗涤次数越多,提取效果越好
提取过程中如果得到的核酸杂质过多,很多使用者都会考虑多进行几次洗涤,来得到更加纯净的核酸。虽然增加了洗涤的次数确实有利于提取纯净的核酸,但是每次洗涤都会损伤一定量的核酸,并且还会增加核酸断裂水解的几率,因此建议将洗涤次数控制在2~4次。
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